| 反應(yīng)種屬 | / |
| 檢測(cè)范圍 | 若需獲取詳細(xì)內(nèi)容及操作程序，敬請(qǐng)下載產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)查閱。 |
| 物理性能 | 液體組分應(yīng)澄清，無(wú)沉淀或絮狀物；所有組分應(yīng)無(wú)包裝破損。 |
| 用途 | 僅供科研使用，定量檢測(cè)樣本中的磺胺的殘留量。 |
| 實(shí)驗(yàn)原理 | 若需獲取詳細(xì)內(nèi)容及操作程序，敬請(qǐng)下載產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)查閱。 |
| 特異性 | / |
| 重復(fù)性 | 批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 10%，批間變異系數(shù) CV%小于 15%。 |
| 回收率 | 若需獲取詳細(xì)內(nèi)容及操作程序，敬請(qǐng)下載產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)查閱。 |
| 試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 | 1、酶標(biāo)儀 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī) 5、25℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml 量筒 7、無(wú)粉一次性乳膠手套 |
| 操作程序 | 1、將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。 2、加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本 50?l/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物 50?l/孔，再加入 50?l/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩 5 秒混勻，25℃反應(yīng) 45 分鐘。 3、小心揭開(kāi)蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加 350ul 工作洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù)洗滌 5 次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。 4、每孔加入底物液 A 50?l，再加底物液 B 50?l，輕輕振蕩 5 秒混勻，25℃避光顯色 15 分鐘（若藍(lán)色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間）。 5、每孔加入終止液 50?l，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。 6、用酶標(biāo)儀于 450nm 處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng) 450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后 10 分鐘內(nèi)完成。 |
| 注意事項(xiàng) | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請(qǐng)確保上一次使用之后沒(méi)有被污染。 2：酶標(biāo)板單次未使用完，要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問(wèn)題分析 | ①問(wèn)題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問(wèn)題描述：精密度低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.洗滌不充分——按說(shuō)明書(shū)要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問(wèn)題描述：O.D值低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過(guò)混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來(lái)檢查 5.沒(méi)有加入終止液——按照說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液 6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說(shuō)明書(shū)推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù) ④問(wèn)題描述：樣本值 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問(wèn)題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。 |
ELISA試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題與解析
問(wèn)題表現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的R²值低于0.99，甚至出現(xiàn)“S”形或雜亂無(wú)章的趨勢(shì)。
可能原因：
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤（梯度沒(méi)做好或混勻不充分）。
標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融導(dǎo)致降解。
酶標(biāo)板洗滌不徹底，孔間殘留液體影響吸光度。
解決方案：
標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)配現(xiàn)用，避免多次凍融，稀釋時(shí)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。
確保洗滌步驟規(guī)范，洗板機(jī)噴嘴無(wú)堵塞，手工洗板時(shí)甩干并拍干。
如果曲線仍不理想，嘗試更換標(biāo)準(zhǔn)品或檢查酶標(biāo)儀波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確。
問(wèn)題表現(xiàn)：樣本OD值接近空白孔，無(wú)法有效檢測(cè)目標(biāo)蛋白。
可能原因：
樣本中目標(biāo)蛋白濃度過(guò)低（低于檢測(cè)下限）。
抗體失效或孵育時(shí)間/溫度不足。
樣本處理不當(dāng)（如反復(fù)凍融、未加蛋白酶抑制劑）。
解決方案：濃縮樣本（超濾離心）或換用高靈敏度ELISA試劑盒。
檢查抗體有效期，確保孵育時(shí)間充足（可適當(dāng)延長(zhǎng)）。
新鮮樣本優(yōu)先，避免反復(fù)凍融，必要時(shí)添加保護(hù)劑。
問(wèn)題表現(xiàn)：空白孔或陰性對(duì)照OD值偏高，影響結(jié)果判讀。
可能原因：
封閉不充分（封閉液選擇不當(dāng)或時(shí)間不足）。
抗體交叉反應(yīng)或非特異性結(jié)合。
洗滌不徹底，殘留試劑導(dǎo)致假陽(yáng)性。
解決方案：
優(yōu)化封閉條件（常用BSA或脫脂奶粉，封閉時(shí)間可延長(zhǎng)至1-2小時(shí)）。
增加洗滌次數(shù)（如從3次增至5次），確保每孔洗滌液加滿。
更換特異性更高的抗體，或調(diào)整一抗/二抗稀釋比例。
問(wèn)題表現(xiàn)：同一批樣本檢測(cè)，孔間差異大，CV值超過(guò)20%。
可能原因：
加樣操作不一致（手法、速度差異）。
酶標(biāo)板邊緣效應(yīng)（邊緣孔蒸發(fā)快，溫濕度不均）。
試劑未平衡至室溫直接使用。
解決方案：
使用多通道移液器，統(tǒng)一加樣速度和角度。
孵育時(shí)覆蓋板蓋，避免邊緣孔干燥，可棄用邊緣孔作空白。
所有試劑使用前室溫平衡30分鐘，避免溫度差異影響反應(yīng)效率。
1.樣本處理：血清/血漿避免溶血，細(xì)胞裂解液需離心去除碎片，組織樣本勻漿充分。
1.
2.試劑保存：抗體、酶結(jié)合物等按說(shuō)明書(shū)要求保存（-20℃分裝避免反復(fù)凍融）。
3.儀器校準(zhǔn)：定期檢查移液器準(zhǔn)確性，酶標(biāo)儀做波長(zhǎng)和光路校準(zhǔn)。
4.對(duì)照設(shè)置：每板必設(shè)空白孔、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，監(jiān)控系統(tǒng)誤差。
如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常，可以按以下步驟快速排查：
檢查試劑：是否過(guò)期？是否正確保存？
回顧操作：孵育時(shí)間、溫度、洗滌步驟是否規(guī)范？
分析數(shù)據(jù)：標(biāo)準(zhǔn)曲線是否正常？對(duì)照是否符合預(yù)期？
重復(fù)實(shí)驗(yàn)：換新試劑或調(diào)整條件后重試。
ELISA雖然操作簡(jiǎn)單，但“細(xì)節(jié)魔鬼”常常藏在加樣、洗滌、孵育這些基礎(chǔ)步驟里。遇到問(wèn)題時(shí)，耐心對(duì)照說(shuō)明書(shū)、排查關(guān)鍵環(huán)節(jié)，往往能事半功倍。如果反復(fù)失敗，不妨聯(lián)系試劑盒技術(shù)支持——畢竟，好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果=靠譜的試劑+規(guī)范的操作+一點(diǎn)點(diǎn)的運(yùn)氣！
聯(lián)系我們
服務(wù)熱線
掃一掃，加微信客服
版權(quán)所有：泉州市睿信生物科技有限公司 | 閩ICP備18019542號(hào) | 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng)
